SPR-BioNavis
- 箱体背后电源打开,打开软件(SPR Navi),Control window里看温度是否稳定,close。
- 打开推样器(柱塞泵),每隔一段时间转一会SPR旋钮,稳定30min。
- Config里选路径path –> Measurement里Angle选Full range –> Init Scan里Start,看是否只有一个峰(向下的峰,横坐标为角度),若是则用右下角”+”选中峰值区域(不多不少,几乎正好包括整个峰,大概65°-80°);若不是,则可能是在35°左右也出峰,这表明有气泡,此时可加速冲洗一下。
- Go to angle scan里start即可(检查SPR curve)(不需要再调角度,此时角度为custom,即之前选定的范围)。
- 基线以50 ul/min,蛋白进样10 ul/ml,后冲洗50 ul/min,三阶段均为10 mins。
- 注意:线下修饰时表面要有饱满的液体鼓包;BSA进样前必须过膜;PBS用前需脱气(水浴加热到60 C后真空干燥箱内不关泵抽5 min真空)。
- 用完后用100-200 ul/min的流速冲洗芯片,换芯片前停泵停软件。
- SDS十二烷基硫酸钠(MW:288.38),0.5 g/100 ml用于清洗。
SPR-Biocore
- 开启仪器后面的按钮启动仪器,power亮绿灯表示接通电源;temperature亮表示稳定在设定温度(25 C),黄灯闪烁表示温度不稳定;sensor chip在装载传感芯片且传感芯片准备就绪时亮起,*色表示插入芯片但未装载,绿色表示运行;run绿色表示运行。
- 开机时power灯亮,temperature灯亮或闪烁,sensor chip熄灭或闪烁,run熄灭。
- 开软件Biocore X100,输入用户名、密码。
- 确保左边托盘上的玻璃瓶内装有新鲜缓冲液或水,并且两根缓冲液管已插入液面以下。
- 确保右侧托盘上的废液瓶内为空,且废液管已插入废液瓶中。
- 单击Load Samples图标,等待Rack locked指示灯熄灭后取出样品架,在4 ml小瓶中加满去离子水,将样品架插入样品室,在Load Samples对话框中单击OK。
- 此时芯片处于未加载状态,单击undock chip图标,打开芯片舱门,取出维护芯片,清洗表面灰尘后装入芯片仓,单击ok装载芯片。
- Tools –> prime使缓冲液注满系统,缓慢冲洗至少1-2 h。
- 仪器清洗 –> prime –> 换好缓冲液和样品 –> 测样 –> prime
- 用完后用100-200 ul/min的流速冲洗芯片,换芯片前停泵停软件。
仪器维护:
相关试剂: BIAdsorb soution1、BIAdsorb soution2、BIAdisinfectant solution。
Tools –> more Tools –>
Desorb(用时~0.5 h):S1提示用量1000 ul,实际用量~700 ul;S2提示用量1000 ul,实际用量~800 ul。
Desorb and sanitize(用时~1 h,之后还需待机平衡3-4h才可测样):S1提示用量10 ml,实际用量~4 ml;S2提示用量10 ml,实际用量~3.5 ml;消毒液(次氯酸钠)提示15 ml,试剂~7.5 ml。
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